吉他的六根弦是按照三度、四度音程来定弦的。常用的调弦方法有以下几种：使用“定音笛”、同度调弦法、泛音调弦法、电子校音器。
1、“定音笛”
使用“定音笛”，吉他专用的定音笛各音高与六根空弦的音高是对应关系，从低到高的音高依次是E、A、D、G、B、E，与吉他六根琴弦是一一对应。也可以使用钢琴等有固定音高的乐器作为参照。音乐会上往往使用音叉，它振动时国际标准音高A（440Hz），先把第五根弦调准，然后根据第五根弦的音高，依次调准其余各弦。
2、同度调弦法
同度调弦法：即同音异弦。调整第①弦的音高，用音叉确定第①弦的音高为E（Mi）；调整第②弦的音高，按第②弦第5品位所发的音高与第①弦空弦的音高E（Mi）相同；调整第③弦的音高，按第③弦第4品位所发的音高与第②弦空弦的音高B（Si）相同；调整第④弦的音高，按第④弦第5品位所发的音高与第③弦空弦的音高G（Sol）相同；调整第⑤弦的音高，按第⑤弦第5品位所发的音高与第④弦空弦的音高D（Re）相同；调整第⑥弦的音高，按第⑥弦第5品位所发的音高与第⑤弦空弦的音高A（La）相同；
3、泛音调弦法
泛音调弦法：利用空弦和泛音进行校对比较准确，根据第①弦空弦音E，校对第⑤弦第7品泛音E和第⑥弦第5品泛音E；以第⑤弦第5品泛音A，校对第④弦第7品泛音A；以第④弦5品泛音D，校对第③弦7品泛音D；以第①弦7品泛音B，校对第②弦5品泛音B；泛音调弦法迅捷、准确。
另外，有时会用到特殊调弦，由于需要扩大音域或者便于演奏，吉他的调弦定音会根据乐曲的特殊要求来确定，常见的是把第⑥弦降低为D。
吉他的六根琴弦，按从下到上分别为e1,b1,d,a,g,e但第6弦也会根据演奏曲目调为d，由于吉他声调较低一般实际演奏时比在高音谱（G谱）的记录要高8度,按照市面上吉他定音笛虽然每根弦的基音能快速确定,但演奏时却可能感到不太和谐，这里推荐两种种定音方法：1，先用定音笛或音叉（钢琴等其他定过音的乐器，或信号发生器等均可）确定某一弦。2，其他各弦按泛音（就是左手指轻按某弦的第5，7，13等品位上，右手拨弦，左手快速离开弦）确定。具体如下：
第6弦第5品——第5弦第7品
第6弦第13品——第1弦，空弦
第5弦第5品——第4弦第7品
第4弦第5品——第3弦第7品 第2弦第5品——第1弦第7品
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